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原代細胞NK培養試劑盒簡介

I.    NK細胞治療簡介 
        
以腫瘤免疫治療為核心的生物治療已成為繼手術、放療、化療后的第4種治療模式。此方法采用患者自身細胞誘導,激活自體細胞,輔助或者刺激人體自身免疫系統,完善或增強患者的免疫機能,因而治療手段安全,基本無毒副作用,近年來顯示出良好的臨床應用前景。NK細胞又稱大顆粒淋巴細胞,是先天性免疫系統的重要組成部分,是機體抗感染免疫、抗腫瘤免疫及清除異己細胞的第一道防線。NK細胞功能不同于T、B淋巴細胞,因為其識別靶細胞無主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex,MHC)分子限制性,不需要抗原刺激預先致敏便可以直接殺傷腫瘤細胞及病毒感染細胞,所以NK細胞是人類病毒感染和惡性腫瘤的免疫過繼治療的潛在效應細胞。
       
NK細胞憑借其殺瘤譜廣、殺瘤活性高的優勢,可以在不損傷機體免疫系統結構和功能的前提下直接殺傷腫瘤細胞,并且具有調節和增強機體的免疫功能,尤其對手術后或放化療后患者效果顯著,能消除殘留微小的轉移病灶,防止癌細胞擴散和復發,提高機體免疫力,是目前新一代的腫瘤過繼細胞免疫治療首選方案之一。
       
目前國內NK細胞的分離培養技術良莠不齊,主要存在以下缺點:
        1、分離得到的細胞純度低,活性小。目前國內采用的淋巴細胞分離方法分離得到的淋巴細胞純度較低,其中混雜有粒細胞,血細胞,血小板且細胞活性低。通常采用的純化NK細胞的方法有親和板法、補體裂解法、綿羊紅細胞花環法及Percoll不連續密度梯度離心法所獲得的NK細胞細胞或者純度低、或者數量少、又或者活性低,細胞碎片回輸至人體后易引發病人產生發燒,炎癥等不良反應。本試劑盒采用密度梯度離心法分離外周血,獲得單核細胞,經因子誘導后得到的NK細胞純度可以達到95%以上,細胞活性達98%以上。
       2、NK細胞增殖速度緩慢。目前國內培養的NK細胞增殖速度緩慢,無法達到腫瘤病人治療所需要的數量級。本試劑盒在培養NK細胞14天后,細胞數量可達到1×109個/ml,充分達到腫瘤病人治療所需的有效數量級
。
      3、有效抑瘤因子表達水平低。NK細胞的細胞毒性與CD3-CD56+的表達成正相關趨勢。目前國內培養的CIK細胞中CD3-CD56+的表達低下,不足10%,本試劑盒培養的NK細胞中CD3-CD56+的表達高達28%,具有更好的臨床效應。 


II.     PrimaCell? NK試劑盒簡介 

    PrimaCell?NK試劑盒是一個包含完整NK細胞的分離培養系統,以引導逐步誘導擴大培養NK細胞的試劑盒。NK細胞培養試劑盒為體外淋巴細胞培養試驗,臨床一些腫瘤患者等提供必備的培養試劑及耗材。

    NK細胞表達CD56 表面抗原,不表達CD3表面抗原,根據CD56抗原的不同表達,NK細胞可分為兩大亞群,僅有約10%NK細胞為CD56brightCD16dim細胞,約90% NK細胞為CD56dim CD16bright細胞。CD56bright CD16dim細胞是主要的免疫調節細胞,能夠產生大量的免疫調節因子,包括干擾素γ(interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、TNF-β、粒-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)、白細胞介素(interleukin,IL)-10以及IL-13,但自然細胞毒作用較弱。CD56dimCD16bright細胞主要發揮自然細胞毒作用,分泌細胞因子能力較弱。本試劑盒中所用NK 細胞分離和誘導體系中,CHI-1號試劑(9-1251)從外周血中分離PBMCs得率較高,純度較好。CHI-2號試劑(9-1252)保證PBMNCs的活性較好。NK-1號試劑可以增強細胞的增殖作用及增強對IL-2R的刺激效應。NK-2號試劑可增加來自CD34+細胞的NK細胞數量,而且可以增加CD34+HSC上IL-2/IL-15R的表達。

    該試劑盒建立了分離誘導培養NK細胞的一個最佳實驗體系,與文獻中其他分離誘導體系相比,本試劑盒分離誘導得到的NK細胞增殖較快。該試劑盒適用于人和哺乳動物NK細胞分離培養,不含有HIV、HBV、HCV、細菌、支原體、真菌、酵母;不含有內毒素和苯。


III.     NK細胞試劑盒試劑耗材組成

          l 細胞分離體系-----CHI-1(人淋巴分離液)

          l 外周血樣本處理體系----- CHI-2(2.5%的人BSA 的D-PBS)試劑

          l NK細胞增殖和誘導體系-----NK-1、NK-2號試劑 

          l NK細胞培養基

          l 1.8L細胞培養袋


附:NK細胞及細胞鑒定圖片

培養第5天的NK細胞(×200

CD3-CD56+流式鑒定NK細胞



CD3-CD56+流式鑒定NK細胞

參考文獻:

1.Yu H,Fehniger T A,Fuchshuber P et al.FLT3 ligand promotes the gene- ration of a distinct CD34+ human natural killer cell progenitor that respo- nds to interleukin-15[J].Blood,1998;92(10): 3647-3657

2. Miller J S,Tessmer-Tuck J.Endogenous IL-2 production by natural killer cells maintains cytotoxic and proliferative capacity following retroviral-mediated gene transfer[J].Exp Hematol,1997:25(11):1140-1148

3.Mingari M C,Vitale C,Cantoni C et al.Interleukin-15-induced maturati- on of human natural killer cells from early thymic precursors:selective expression of CD94/NKG2-A as the only HLA class Ispecific inhibitory receptor[J].Eur J Immunol,1997:27 (6):1374-1380

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